脲酶（活性）檢測

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脲酶（活性）檢測概述

脲酶（Urease）是一種廣泛存在于微生物、植物和動物組織中的水解酶，能夠催化尿素分解為氨和二氧化碳。其活性檢測在農(nóng)業(yè)、食品工業(yè)、環(huán)境監(jiān)測及醫(yī)療診斷等領(lǐng)域具有重要意義。例如，土壤中脲酶活性可反映氮素轉(zhuǎn)化效率，食品中脲酶的殘留可能影響產(chǎn)品品質(zhì)，而幽門螺桿菌的脲酶活性則是臨床診斷的重要指標(biāo)。準(zhǔn)確檢測脲酶活性對優(yōu)化生物過程、保障食品安全及疾病篩查具有關(guān)鍵作用。

檢測項目

脲酶活性檢測的核心目標(biāo)是量化單位時間內(nèi)尿素分解產(chǎn)物的生成量或尿素消耗量。常見檢測項目包括：酶活性單位（U/g或U/mL）、適反應(yīng)條件（pH、溫度）、抑制劑或激活劑的影響分析，以及不同樣品（如土壤、食品、微生物培養(yǎng)物）中脲酶的動態(tài)活性監(jiān)測。

檢測儀器

實驗需依賴以下關(guān)鍵儀器設(shè)備：
1. 分光光度計：用于測定靛酚藍(lán)法等顯色反應(yīng)的吸光度變化；
2. pH計：監(jiān)測反應(yīng)體系中pH值的動態(tài)變化；
3. 恒溫水浴鍋：維持酶促反應(yīng)的恒定溫度（通常30-37℃）；
4. 離心機：處理樣品中的懸浮顆粒；
5. 微量移液器：控制反應(yīng)體系中的液體體積。

檢測方法

主流檢測方法包括：

1. 靛酚藍(lán)法（Berthelot法）

通過測定氨與次氯酸鹽、苯酚生成的藍(lán)色化合物吸光度（630nm），計算脲酶活性。步驟包括：樣品預(yù)處理→底物反應(yīng)→終止反應(yīng)→顯色測定→標(biāo)準(zhǔn)曲線比對。

2. pH變化法

實時監(jiān)測尿素分解導(dǎo)致的pH升高，通過pH變化速率推算酶活性。需使用緩沖能力較弱的反應(yīng)體系，并配合自動滴定儀記錄數(shù)據(jù)。

3. 電導(dǎo)率法

基于反應(yīng)中離子濃度變化引起的電導(dǎo)率改變，適用于快速篩查和高通量檢測。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

國內(nèi)外常用標(biāo)準(zhǔn)包括：
- ISO 11266:1994：土壤中脲酶活性測定規(guī)范；
- GB/T 34799-2017：中國標(biāo)準(zhǔn)中酶制劑活力的測定方法；
- AOAC 960.09：食品中脲酶活性的定性檢測方法；
- CLSI M45-A3：臨床微生物實驗室中幽門螺桿菌脲酶試驗指南。

注意事項

檢測過程中需注意：
- 嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和時間，避免酶失活；
- 校準(zhǔn)儀器并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性；
- 對高濃度樣品進行梯度稀釋，防止超出檢測線性范圍；
- 生物樣本需在低溫下保存（4℃或-20℃），避免反復(fù)凍融。